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倒置顯微鏡與相差顯微鏡有何區別?

發布時間:2023-01-13      點擊次數:665
   倒置顯微鏡是一種結構型態,相差顯微鏡是一種功能劃分,兩者無法直接對比。
  倒置顯微鏡配備相差環板來實現相差
  倒置生物顯微鏡通常屬于相差顯微鏡。倒置顯微鏡的透射光源在載物臺上,物鏡在載物臺下,故稱“倒置顯微鏡”。倒置生物顯微鏡的透射光源和物鏡都是長工作距離設計,通常會配備推拉式相差環板和相差物鏡,可實現相差觀察功能,以便觀察接近透明的未染色細胞等樣品。
  正置顯微鏡也可以實現相襯觀察,只是相對少見。簡易的正置相襯使用類似倒置的推拉式相差環板,搭配帶插槽的聚光鏡,由于尺寸更小,精密度要求更高,而且可能還會有漏光等問題,更可靠的設計是轉盤式切換的聚光鏡,這是很多正置顯微鏡實現相襯切換的思路。
  相差可以觀察透明細胞樣本
  相差顯微鏡指能進行相差觀察的顯微鏡,相差觀察又稱相襯觀察、澤尼克相襯法觀察,是一種利用相位差物理原理提升透明樣品對比度的技術,主要用于未染色的細胞等樣品,這些樣品在明場下幾乎是透明的,難以看清,而染色則會影響其活性因而不適用,通過相差觀察,樣品物質和厚度的差異將會轉化成對比度,從而揭示明場觀察無法看清的細節。
  相差不適合看厚的和楔形的樣品,升級DIC解決
  相差觀察的優點很明顯,它可以不用染色就看清培養皿中的細胞和水中的微生物等樣品,十分方便且實現成本低,局限在于不適合厚度大的樣品,以及楔型結構的樣品,這些樣品可能需要用DIC微分干涉相襯或者HMC霍夫曼調制相襯來進行觀察,前者具有非常好的立體感和的細節表現能力,但成本高,后者雖然會有色差問題,但能以顯著更低的成本實現類似DIC的強立體感,適合批量部署,因此在IVF輔助生殖等領域會有應用。
  除常規相差,還有特殊的負相差
  相襯觀察還有正負和對比度高低之分,常見的相襯是正相襯,背景是亮色的,樣品被高亮光環包圍。而負相襯背景呈暗色,類似暗場,樣品主體會呈高亮。負相差物鏡有高對比(NH)和中對比度(NM)區別,會標記在物鏡上。
  無限遠倒置熒光顯微鏡合成圖像
  最后還有一點需要補充的是,固定筒長顯微鏡和無限遠光學顯微鏡在相襯使用上的一個區別。在切換相襯和熒光觀察方式時,需要把光學元件移入和移出光路,對于固定筒長顯微鏡來說,額外的光學元件移入后,需要做補償以滿足固定筒長需要,作為結果,不同觀察方式會有一定的成像倍率差異,視野不是一致的。
  無限遠光學顯微鏡可以做到相襯成像視野和熒光成像視野一致,因此可以拍攝合成出有輪廓感/立體感的細胞熒光圖像。一般這需要先用平場消色差相襯物鏡拍攝相襯,然后切換到半復消色差物鏡拍攝熒光,以免損失熒光亮度,為了方便用戶進行這種拍攝,明美還推出了半復消色差相襯物鏡,可以一個物鏡把相襯和熒光都拍好。
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